PG电子细胞培养条件：

培养气相：95%空气与5%二氧化碳；培养温度为37℃。首次传代建议使用1:2的比例。

传代操作说明：

在细胞培养2天后，进行液体更换。如需进行大量采购，建议同时购买，以获取更多优惠。接收到细胞后，应处理到良好的状态，然后将完全培养液注满并封紧瓶口，确保运输期间细胞的最佳保护。

收到细胞后，需用75%酒精喷洒消毒整个细胞瓶，之后在超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞的生长情况，拍照记录不同倍数下的细胞图像（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片作为重要的售后依据，如未提供照片则默认细胞状态良好。

细胞培养步骤：

a. 细胞传代：如果细胞汇合度未超过80%，则将完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代培养。

贴壁细胞传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞情况，若大部分细胞变圆并脱落，迅速回操作台，轻轻敲击培养瓶后加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落并吸出，随后将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液以1:2的比例分瓶（两个T25瓶），补充5-8ml新的完全培养基，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代步骤：

1. 使用半换液法，在培养箱中竖放培养瓶静置约1小时，轻轻吸去3ml左右的培养基，然后补加3ml的完全培养基。若培养基颜色变化缓慢，可直接添加约500ul FBS，传代时可直接补充5ml培养基分至两个培养瓶，通常此方法可使用3次后再进行离心传代以去除死细胞。
2. 离心换液法：若需分瓶，可将细胞悬液收集至离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬，将细胞悬液按1:2的比例分至新的T25瓶中，添加6-8ml符合说明书的完全培养基，以维持细胞的生长活力，后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

b. 细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖T25培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后转移悬液至15ml离心管中，进行1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，在沉淀细胞中加入1ml PG电子无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存。如后期需转移至液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速将其置于37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，将细胞重悬于5ml完全培养基中，并接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基以继续培养。

注意事项：

部分细胞在运输过程中可能会易于脱落，这是正常现象。如脱落细胞较多，可将所有培养液收集至离心管中以1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后续对比培养），沉淀中加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后添加5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，最后以1:2的比例分瓶培养（两个T25瓶），补充新蛙面的完全培养基至5-8ml每瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中进行细胞培养。